流式细胞仪液流系统简介
发布日期：2021-06-01 14:41
流式细胞仪包括三大核心组件：液流系统，光学激发和光电检测系统。
液流系统
流式细胞仪能够对复杂样本中单个细胞的物理特性进行定量检测及分析。这需要液流系统输送大量细胞至流式细胞仪，以便生成具有统计学意义的数据。进入和通过仪器的细胞流必须保持稳定，以实现准确的计数和检测。基于压力和基于体积的液流系统是两种常见的使细胞进入流式细胞仪的机械动力学装置。包含大量细胞的样本可以通过基于压力的液流系统产生的压力快速进入仪器，通过密闭的样本管，形成压力系统。此密闭的样本管利用样本和鞘液之间的压力差，将样本聚焦至光学系统。基于压力的系统可实现平稳持续进样、进样体积更大，且样本耗尽的风险较小。基于体积的液流系统可实现更灵活的细胞进样。该装置的机制是可以准确测量进入流式细胞仪的样本体积。其优势包括：能够进行细胞绝对计数；可以处理复杂样本，包括粘性细胞或体积较大的细胞；并且与基于压力的进样系统相比，该装置抗堵性能更优。该系统非常灵活，因为属于非压力系统，所以适用于多种试管或微孔板上样。
利用流式细胞术鉴定肿瘤样本中的肿瘤细胞、B 细胞、T 细胞及其他免疫细胞。肿瘤样本很可能堵塞管路及其他部件。这些组织样本需要预先消化成单细胞，该过程会导致死细胞释放DNA，从而容易形成细胞团块。如何在检测肿瘤样本时减少发生仪器堵塞的风险？
解决方案：
• 使用配备注射泵驱动的液流系统的仪器，可以最大程度地减小由于压力系统引起的堵塞问题。
• 稀释样本。
• 减少流式实验中样本细胞制备时间。通过下列方法可以优化实验：
— 尽量缩短孵育时间
— 在样本中添加EDTA
— 在样本中添加DNA酶和RNA酶
— 上样前将所有样本通过40um细胞筛网
• 上下吹打样本，使细胞机械解离，并且上样前将样本管进行涡旋混匀。
• 兼容多种反应板规格：1.5ml/2ml离心管、96孔、384孔及不同规格的深孔板；
• 智能探针设计：自动识别板盖和锡箔纸，防止撞针，保护样品免受长时蒸发；
• 2X注射泵：速度加快1倍，22min完成96孔板，抽吸式混合样品，保护样品活性；
• 温控保护：保护低温稳定孔板内细胞状态；
• 一键切换：自动进样器和单个试管间方便切换，可真正保持数据的高度一致性。
液流系统之细胞聚焦
样本中的细胞最初是以未排列的无序方式进入流式细胞仪。在理想状态下，细胞排成一列经过激光检测区，逐个进行检测，但在某些情况下（遵循Poisson 分布或含有细胞团块的样本），细胞会聚集在一起。当激光检测区一次有多个细胞通过时，称为重合现象。两个细胞同时经过激光检测区会导致仪器难以区分目的细胞。如果一个细胞为阳性，另一个为阴性，且它们一起通过激光检测区，则仪器将视为阳性信号。此时获取的数据为双重数据，属于无效数据。液流聚焦技术可保证光学系统中的单细胞分析。不同类型的液流系统均可使单个细胞依次通过激光检测区。大部分流式细胞仪采用传统的流体聚焦技术，如流体动力学聚焦。该技术利用鞘液和细胞样本之间的压力和速度差，推动细胞前进。其他液流系统采用声波辅助的流体动力学双重聚焦技术。这种聚焦技术对传统液流系统进行了改进，利用超声波先将细胞聚集到样本流的中心后，然后利用传统的流体动力学技术将细胞进行聚焦并输送至光学系统。声波辅助的流体动力学聚焦可减少鞘液用量，同时保持了流体动力学聚焦的优点。声波聚焦和鞘液结合使用，可将样本细胞排成一列进行检测，从而使流式实验运行速度更快、重合率更低；鞘液消耗量低还能保持流动室清洁、更不易发生堵塞。
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